Estudo da coloração de mieloperoxidase aprimora o diagnóstico de doenças sanguíneas

A coloração por mieloperoxidase (MPO), também conhecida como coloração por peroxidase leucocitária (POX), é um método de coloração citoquímica amplamente utilizado.Esta técnica detecta a actividade da peroxidase intracelular para ajudar no diagnóstico de doenças hematológicas, particularmente na classificação da leucemia.

A coloração de MPO depende da reação catalítica da peroxidase intracelular. Esta enzima quebra óxidos para produzir oxigênio, que então reage com iodeto de potássio para formar iodo.O iodo combina com o corante Wright-Giemsa, criando grânulos coloridos no citoplasma que revelam a distribuição da peroxidase sob microscopia.permitindo a coloração MPO para distinguir entre eles.

A coloração padrão de MPO requer kits de reagentes especializados para garantir precisão e confiabilidade.

• Solução A: solução de eosina- Um corante ácido que mancha o citoplasma de vermelho ou rosa
• Solução B: Azure II- Um corante básico que mancha os núcleos de azul ou roxo
• Solução C: tampão PBS de iodeto de potássio- Contém o substrato de reacção da peroxidase e mantém a estabilidade do pH
• Solução D: mancha Wright-Giemsa- Uma coloração de duplo propósito que melhora a morfologia celular.

Os kits estão disponíveis em vários tamanhos (configurações de 5 testes, 20 testes e 100 testes) para acomodar diferentes necessidades de laboratório.

1. Preparação da solução de trabalho: Misturar solução C com solução D (normalmente 1,0 ml: 250 μl).
2. Fixação de manchas: Fixar os esfregaços preparados de medula óssea ou sangue com metanol ou etanol durante 5 a 10 minutos.
3. Coloração: Mergulhar os esfregaços fixos em solução de trabalho durante 5 a 10 minutos, controlando a temperatura e a umidade.
4. Limpeza: Lavar suavemente com água destilada ou tampão PBS para remover o excesso de mancha.
5. Contrastantes(opcional): utilizar hematoxilina para aumentar o contraste nuclear.
6. Secagem: Seque ao ar ou use um secador de cabelo.
7. MicroscopiaExaminar esfregaços manchados para avaliar a actividade e distribuição da peroxidase.

A interpretação dos resultados requer conhecimentos especializados.

• Reacção positiva: Grânulos citoplasmáticos de cor vermelha-marrom a azul escuro (positividade fraca versus forte).
• Reacção negativa: Citoplasma azul sem grânulos e núcleos uniformemente roxos-púrpura.
• EosinófilosExibem intensa coloração azul escuro, por vezes com cristais extracelulares em forma de agulha.

• Classificação da leucemia: Distingue a leucemia mieloide (MPO- positiva) da leucemia linfoide (MPO- negativa), orientando as decisões de tratamento.
• Diagnóstico de leucemia mieloide aguda (LMA): Confirma a origem mieloide e ajuda a subtipar, com taxas de positividade variadas indicando diferentes subtipos de LMA.
• Avaliação da síndrome mielodisplástica (SDM): Avalia a maturação e diferenciação celular, com padrões MPO anormais sugerindo MDS.
• Outras doenças hematológicas: Útil no diagnóstico da leucemia mieloide crónica e da mielofibrose.

• Qualidade e condições de armazenagem do reagente
• Respeito estrito do protocolo
• Preparação adequada do esfregaço
• Duração ideal de coloração
• Avaliação microscópica por patologistas

Os avanços tecnológicos continuam a melhorar a coloração de MPO. A imunohistoquímica agora combina MPO com marcadores imunes para maior precisão, enquanto a citometria de fluxo permite a detecção quantitativa de MPO.À medida que este método citoquímico clássico evolui, promete contribuir ainda mais para o diagnóstico e tratamento hematológicos.